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leniobio AL0103500說明書

更新時間:2019-10-30      點擊次數:2950

LenioBio GmbH是一家專注于蛋白質表達解決方案的生物技術公司。LenioBio總部位于德國杜塞爾多夫,由商業資深人士和蛋白質表達專家于2016年成立。2018年三月,LenioBio簽署了陶氏益農的許可協議,以推出自己專有的無細胞蛋白質表達技術下LenioBio品牌愛麗絲®。LenioBio目前正在進一步開發該技術,通過智能設計進行創新,以利用自然的力量來加速合成生物學。歷史和背后的愛麗絲技術的特點®在技術部分描述。

在LenioBio,我們所做的一切都始于我們的使命:為客戶提供創新的解決方案,以的輕松,快速和的方式應對嚴峻的挑戰。這種深切的承諾是我們的名字Lenio的核心,它源自拉丁語“緩解,減輕,改善”。

LenioBio –應用性更好的科學。

leniobio AL0103500說明書

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描述

“愛麗絲®是一個*的真核無細胞系統,可以生成一個的3毫克/毫升在批處理模式的蛋白質,與市場上的其它真核無細胞系統,它僅產生0.1毫克/毫升或更小進行比較。即使是通常只能處理易于表達的蛋白質的原核無細胞系統,也只能以批處理方式產生1 mg / mL的蛋白質。”

技術指標

規格信息

套件組件

來源于植物細胞的細胞裂解液

保質期

12個月

貯存溫度

-70°C至-80°C

活動驗證

至少3毫克的表達/以下愛麗絲的手動時毫升增強黃色熒光蛋白的®

 

 

用戶提供的設備和材料:

手套

•吸管過濾頭(無核糖核酸酶)

•無核糖核酸酶的水(例如來自微孔過濾裝置的水)

•軌道振動篩

o當在試管中進行反應時:

桌面搖床(2毫升容器插入物),搖床直徑:3毫米或0,當在平板中進行反應時:

濕度控制(高達80%)的振動篩,振動直徑:25 mm,帶固定板和96個半孔板(無RNase)

 

運輸和儲存

Alice®套件采用干冰運輸。到達后,立即按上表所示存放部件。在這些條件下,反應混合物至少穩定12個月。

產品使用限制

這個工具包僅供研究之用。不得用于疾病的診斷、預防或治療,也不得用于人類。請參閱我們網站上的有限使用標簽許可證(LULL):

產品保修

工具包是用干冰冷凍運輸的。如果交貨時包裝內沒有干冰,或者包裝損壞,則可能會影響套件的質量。如果交貨有任何問題,請立即與我們聯系。保修有效期至產品標簽上注明的到期日。

質量管理

高質量的化學品和材料已被用于制造該套件的組件。每批產品都經過仔細的測試,以確保所有部件都符合規定的規格(見分析證書)。

安全

使用者應遵守處理化學品和重組DNA的所有適用法規。處理套件組件時,應穿戴實驗室工作服、安全眼鏡和手套。處理超冷材料時,請戴上額外的防護手套,以免凍傷。使用過的部件應按照當地法規進行處理。

免責聲明

對于因使用、誤用或因使用本工具包而造成的任何直接或間接損害或損失,我們不承擔任何責任。

介紹

從粗細胞提取液中提取的無細胞蛋白表達(cfpe)系統作為一種研究工具已經應用了幾十年,并在蛋白表達技術中引入了許多誘人的優勢。

然而,采用cfpe系統替代細胞法的一個關鍵障礙是蛋白質產量相對較低的問題。

為了解決這個問題,Leniobio利用植物細胞生物學的優勢,引入了一種新的真核細胞自由表達系統:Alice。Alice®在批處理模式下提供的高達3毫克/毫升的蛋白質產量。因此,它能讓你克服活體宿主系統的限制,在數小時內而不是數周內獲得“難以產生”的蛋白質。系統的優點

其中包括:

•高產:高達3 mg/ml的表達蛋白

•易于使用:一步反應方案

•快速:僅需48小時即可獲得高產量

靈活:表示“難以生產”蛋白質、細胞毒性蛋白等。愛麗絲®利用煙草細胞裂解物,耗盡空泡。該系統包含體外轉錄所需的所有因子(rna聚合酶,ntps)和翻譯反應(核糖體,翻譯起始/延伸因子,trna等)。使用一個簡單的協議,rna轉錄和翻譯都發生在一個單管(耦合轉錄/翻譯)。

反應是通過簡單地混合質粒DNA與愛麗絲®反應混合物開始的。Alice®的蛋白質產量基于反應期間的蛋白質表達。因此,我們建議反應持續時間為48小時。Alice®提供了兩種表達載體,即PALICE01和PALICE02,它們是根據感興趣蛋白質的靶向性而使用的(見第5頁)。當與Alice®表達系統一起使用時,它們被特別定制以提供的蛋白質產量。PALICE01用于在ALICE®胞質部分中的表達。以palice02為靶向微粒體提供了通過翻譯后修飾如二硫鍵來表達蛋白質的機會。

除篩選外,alice®系統還可用于大規模表達靶蛋白。

Alice®系統的潛在附加應用包括:

•目標蛋白特性

•蛋白質優化

•突變篩選

•蛋白質-蛋白質相互作用

•表達分析

•蛋白質定位分析

•蛋白質結構分析

•翻譯后修飾分析

•代謝組學

•除草劑篩選

 

Alice®表達式向量

Alice®提供了兩個不同的表達式向量:palice01和palice02。palice01作為細胞溶質表達載體,而palice02使用信號肽作為微粒體靶向。

微粒體是在Alice®反應混合物的制造過程中,由部分內質網形成的類似細胞器的結構。利用蜂毒素信號肽,蛋白質可以轉運到這些細胞器中(Buntru等人,2014),在那里進行翻譯后修飾。隨后,微粒體可以被破壞以恢復表達的蛋白質(見第9頁)。palice01和palice02也可以作為表達的陽性對照,分別在細胞溶膠和微粒體中加入alice®反應混合物時表達eyfp。

克隆成柵欄載體制備模板

下面提供了包含PALICE01和PALICE02載體特征的地圖(圖1),以及感興趣基因5'和3'方向克隆側的擴展視圖(圖2和圖3)。

克隆位點允許在t7啟動子和5'未翻譯區后面插入感興趣的基因。克隆你感興趣的基因既可以從現有的載體中分離出來,也可以通過PCR擴增其編碼區域來引入適當的限制酶位點。

細胞溶質表達質粒palice01的推薦限制位點為ncoⅠ和kpn i,而微粒體表達質粒推薦限制位點為ncoⅠ/noti或ncoⅠ/kpni。如果使用kpn i進行克隆,請確保打開的閱讀框包含一個停止密碼子。

dna的純化

為了促進的轉錄-翻譯反應,需要高純度的質粒dna制備。因此,強烈建議使用基于陰離子交換色譜法的質粒制備程序(例如Macherey Nagel的Nucleobond®Xtra Midi)。對于基于二氧化硅基質的質粒dna制備試劑盒,我們建議在轉錄-翻譯反應之前添加rnase抑制劑或苯酚氯方純化模板。根據插入物的大小,通過添加適當體積的5 mm Tris緩沖液(pH8.5),將終質粒DNA調整到所需濃度。反應混合物中的終濃度應為5nm。在-20℃下分批儲存。耦合轉錄/翻譯反應設置耦合轉錄-翻譯反應的典型反應體積為50微升。

1)選擇反應容器:

•Alice®試管=每次反應52微升

•96個半孔板,每個反應的Lid1=50微升

2)準備DNA

從倉庫中取出質粒dna模板,并在室溫(20-25°C)下解凍。輕輕攪拌,翻轉并快速向下旋轉,收集試管底部的內容物,然后放在冰上。稀釋或濃縮質粒,組裝反應的終濃度應為5nm。dna濃度對蛋白質產量有顯著影響。

3)解凍Alice®反應混合物

從倉庫中取出Alice®反應混合物,并在室溫(20-25°C)水浴中解凍。通過倒置試管輕輕混合。不要旋渦!解凍后直接放在冰上。解凍后30分鐘內開始反應。將剩余的裂解液直接冷凍在-80°C。不要使用液氮!避免一次以上的凍融循環!

 

 

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