sinobiological STF02說明書
中轉簡介
Sinofection是一種基于陽離子聚合物的優異轉染試劑。它已成功應用于各種細胞系的各種規模的轉染。與市場上*的轉染試劑相比,Sinfection具有更高的蛋白表達水平和更低的細胞毒性。它是用于瞬時和穩定轉染的重組蛋白生產的理想選擇。它與血清,細胞類型,規模和儲存溫度的廣泛兼容性為您提供了研究和生產的便捷和保證。
特征
事實證明,與*競爭對手的產品相比,Sinfection的轉染可在多種細胞系中提供更高水平的蛋白質表達。對于大規模生產重組蛋白,Sinfection是實現適產量的宜選擇。此外,Sinfection還具有很高的轉染效率,可確保成功進行轉染。
圖1在9個細胞系中比較了使用Sinfection和其他競爭者進行瞬時轉染的蛋白表達水平,其中6個顯示出被Sinfection(A?F)轉染的優異結果。通過ELISA測定法確定蛋白質表達水平。競爭對手轉染試劑的轉染遵循制造商的規程。
通過Sinfection在96孔板中的0.1mL到生物反應器中的50L的各種規模的瞬時或穩定轉染,已經成功表達了數百種重組抗體和蛋白質。在所有規模的轉染應用中使用Sinofection,將在很大程度上節省研究和生產成本。
1,轉染規程(35mm培養皿):
(1)細胞的制備
(2)Sinfection&DNA復合物的制備
用適當的稀釋劑(如PBS,NaCl溶液,葡萄糖溶液,DMEM,有或無血清的等滲溶液)稀釋DNA,以等滲形式稀釋至濃度為20μg/ mL(建議優化),總體積為250μL。
在250μL培養基中稀釋適量的Sinofection。
將稀釋的DNA與稀釋的Sinofection混合(總體積= 500μL)。輕輕混合并在室溫下孵育20分鐘(溶液可能看起來混濁)。
(3)轉染
將500μL復合物逐滴添加至細胞和培養基中。輕輕晃動培養皿或孔,以確保均勻分布。
在蛋白質表達測定之前,將細胞在37°C的CO 2培養箱中培養18-48小時(通常在72小時后達到高表達)。
2,轉染方案(瓶):
轉染細胞以表達蛋白質此協議通常用于將DNA轉染到培養在燒瓶中的293 EBNA或CHO細胞中。使用前使用無菌DNA或對DNA進行過濾滅菌(過濾后重新定量DNA)。
所有量均以每瓶為基礎,在125 mL搖瓶中培養30 mL;有關其他格式,請參見表2。按比例放大或縮小轉染。
表2.使用Sinfection擴大或縮小轉染。注意:實際條件應通過實驗優化。
Sinofection顯示出極低的細胞毒性,該毒性已通過內部WST-8測定法針對每批進行測試和驗證。WST-8測定基于線粒體脫氫酶對水溶性四氮唑(WST)的比色還原
甲dye染料溶液的吸光度與活細胞數成正比。與常用的WST-1方法相比,WST-8測定的靈敏度更高,而甲dye染料的溶解度和穩定性更好。
圖3.分別用L2K和Sinfection轉染的HeLa細胞和DG44細胞的顯微鏡比較。按照制造商的建議進行轉染。
圖4. Sinofection和L2K對4種細胞系的細胞毒性比較。按照制造商的建議進行轉染。
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