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sinobiological STF02說明書

更新時間:2020-01-19      點擊次數:2335

 

sinobiological STF02說明書

Sinofection Transfection Reagent

Cat: STF02

中轉簡介

Sinofection是一種基于陽離子聚合物的優異轉染試劑。它已成功應用于各種細胞系的各種規模的轉染。與市場上*的轉染試劑相比,Sinfection具有更高的蛋白表達水平和更低的細胞毒性。它是用于瞬時和穩定轉染的重組蛋白生產的理想選擇。它與血清,細胞類型,規模和儲存溫度的廣泛兼容性為您提供了研究和生產的便捷和保證。

 

 

特征

 

  • 出色的蛋白質表達
  • 粘附細胞和懸浮細胞的出色轉染,可用于多種細胞系
  • 從微量滴定板到生物反應器,DNA轉染(瞬時/穩定)的顯著應用
  • 簡單快速的程序
  • 低細胞毒性

 

-優質的蛋白表達

事實證明,與*競爭對手的產品相比,Sinfection的轉染可在多種細胞系中提供更高水平的蛋白質表達。對于大規模生產重組蛋白,Sinfection是實現適產量的宜選擇。此外,Sinfection還具有很高的轉染效率,可確保成功進行轉染。

圖1在9個細胞系中比較了使用Sinfection和其他競爭者進行瞬時轉染的蛋白表達水平,其中6個顯示出被Sinfection(A?F)轉染的優異結果。通過ELISA測定法確定蛋白質表達水平。競爭對手轉染試劑的轉染遵循制造商的規程。

 

-貼壁細胞和懸浮細胞的出色轉染,適用于多種細胞系

 

-從微量滴定板到生物反應器的規模上,DNA轉染(瞬時/穩定)的顯著應用

通過Sinfection在96孔板中的0.1mL到生物反應器中的50L的各種規模的瞬時或穩定轉染,已經成功表達了數百種重組抗體和蛋白質。在所有規模的轉染應用中使用Sinofection,將在很大程度上節省研究和生產成本。

 

-操作簡便快捷

1,轉染規程(35mm培養皿):

(1)細胞的制備

  • 貼壁細胞
    • 轉染前一天,每35毫米培養皿將0.2–2×10 6個細胞置于培養基中。在37°C(5%CO 2)下孵育過夜。轉染前細胞的融合度應為50–80%。
  • 懸浮細胞
    • 在35毫米培養皿中以5×10 4 / mL到1×10 6 / mL 的密度將2 mL新鮮傳代的細胞平板接種。轉染時,懸浮細胞應處于對數生長期。在37°C(5%CO 2)下孵育細胞過夜。細胞數取決于您的需要和要轉染的細胞類型。

(2)Sinfection&DNA復合物的制備

用適當的稀釋劑(如PBS,NaCl溶液,葡萄糖溶液,DMEM,有或無血清的等滲溶液)稀釋DNA,以等滲形式稀釋至濃度為20μg/ mL(建議優化),總體積為250μL。

在250μL培養基中稀釋適量的Sinofection。

將稀釋的DNA與稀釋的Sinofection混合(總體積= 500μL)。輕輕混合并在室溫下孵育20分鐘(溶液可能看起來混濁)。

(3)轉染

將500μL復合物逐滴添加至細胞和培養基中。輕輕晃動培養皿或孔,以確保均勻分布。

在蛋白質表達測定之前,將細胞在37°C的CO 2培養箱中培養18-48小時(通常在72小時后達到高表達)。

2,轉染方案(瓶):

轉染細胞以表達蛋白質此協議通常用于將DNA轉染到培養在燒瓶中的293 EBNA或CHO細胞中。使用前使用無菌DNA或對DNA進行過濾滅菌(過濾后重新定量DNA)。

所有量均以每瓶為基礎,在125 mL搖瓶中培養30 mL;有關其他格式,請參見表2。按比例放大或縮小轉染。

 

表2.使用Sinfection擴大或縮小轉染。注意:實際條件應通過實驗優化。

  1. 以0.3×10 5細胞/ mL的速率通過293細胞,以175 rpm的速度搖動。72小時后,將細胞稀釋至1.0×10 6細胞/ mL,以175 rpm搖動。4小時后轉染。
  2. 以0.3×10 5細胞/ mL的速度通過CHO細胞,以175 rpm的速度搖動。48小時后,將細胞稀釋至1.0×10 6細胞/ mL,以175 rpm搖動。4小時后轉染。
  3. 用適當的稀釋劑(例如含Mg 2+的 PBS ,150 mM NaCl,300 mM葡萄糖,有或無血清的DMEM培養基)稀釋稀釋所需的質粒DNA量。在室溫下孵育5分鐘。將所需的Sinfection體積添加到稀釋的DNA中,并輕輕混合以確保總體積為1.5?3 mL。
  4. 在室溫下將混合物孵育10-20分鐘,以形成復合物。孵育時間不要超過20分鐘。
  5. 向裝有細胞的125mL燒瓶中緩慢加入1.5?3 mL DNA-脂質混合物,同時緩慢搖動燒瓶。
  6. 對于293細胞和CHO細胞,將轉染的細胞培養物在設置為175 rpm的定軌振蕩器上于37°C,8%CO 2孵育。

 

 

-低細胞毒性

Sinofection顯示出極低的細胞毒性,該毒性已通過內部WST-8測定法針對每批進行測試和驗證。WST-8測定基于線粒體脫氫酶對水溶性四氮唑(WST)的比色還原

甲dye染料溶液的吸光度與活細胞數成正比。與常用的WST-1方法相比,WST-8測定的靈敏度更高,而甲dye染料的溶解度和穩定性更好。

圖3.分別用L2K和Sinfection轉染的HeLa細胞和DG44細胞的顯微鏡比較。按照制造商的建議進行轉染。

圖4. Sinofection和L2K對4種細胞系的細胞毒性比較。按照制造商的建議進行轉染。

 

 

質量控制

 

  • 轉染效率:
    • Sinofection已針對293E細胞株進行了大量測試,以確保一致性和有效性。使用2.8μL的Sinofection,用0.6μg的rhFc表達質粒轉染24孔板中的85%融合293E細胞。
  • 無菌性:
    • Sinofection在無菌條件下生產和包裝,并通過0.22μm無菌過濾器過濾,用于后一步。
  • 細胞毒性:
    • 通過內部WST-8分析評估Sinfection的細胞毒性。

 

使用指南

 

  • 應用:
    • 重組蛋白/抗體的表達與純化
    • 功能基因研究
    • 功能蛋白研究
    • 基因治療
    • 轉基因動物模型
  • 存儲:
    • Sinofection可以在2℃-8℃下保存兩個月,而沒有發現活性下降。抗體產品自收到之日起在-20℃至-70℃下保存可穩定十二個月。耐受凍融循環。

 

 

 

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